加入收藏
百奥莱博公司客服电话百奥莱博QQ百奥莱博QQ百奥莱博QQ
百奥莱博公司微信服务号

产品目录

D-荧光素钾盐图片
产品货号:
KM0177
中文名称:
D-荧光素钾盐
英文名称:
D-Luciferin Potassium Salt
产品规格:
100mg|500mg|1g|1g×5|1g×10
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,D-荧光素(底物)被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性(见下图)。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染进入细胞后,导入研究动物如大小鼠体内,之后注入荧光素,通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化,从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。
当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性

D-荧光素也常用于体外研究,包括荧光素酶和ATP水平分析;报告基因分析;高通量测序和各种污染检测。

目前市场上有三种产品形式,D-荧光素(游离酸),D-荧光素(钠盐),和D-荧光素(钾盐)。这三种产品主要差别在于溶解特性。
1.D-荧光素(游离酸)在水以及缓冲体系内的溶解性都很弱,除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇(10mg/ml)和DMSO(50 mg/ml)。
2.D-荧光素(钠盐)和D-荧光素(钾盐)能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成溶液后的三种产品,在绝大多数应用上都没有实质性的差别。
3.D-荧光素(钠盐)和D-荧光素(钾盐)基本上没有差别,主要是使用习惯等因素影响。整体来看,钾盐的应用文献明显多于钠盐。

主要参数:
CAS NO:115144-35-9
分子式:C11H7N2O3S2K
分子量:318.42g/mol
纯度:>99%(HPLC),分子生物学级(超纯)
外观:浅黄色至黄色粉末
溶解性:溶于水(60 mg/ml)
保存:-20℃干燥避光保存,有效期2年。

使用方法:

一、体外生物发光检测
1.储存液制备
  用蒸馏水溶解D-荧光素(钾盐),配制成15mg/ml的储存液(100×),混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。建议使用的工作液浓度为150μg/ml(相当于468μM)。
2.荧光素酶反应缓冲液制备
  配方(1×,参考Yuichi Oba,et al.,2003):100mMTris-HCl(pH 7.8),5mM MgCl2,250μMCoA,150μMATP。具体缓冲液组成可参考其他文献资料来调整。按照以上配方制备荧光素酶反应缓冲液(2×)。
3.收集细胞裂解上清(荧光素酶表达)
  根据需要检测的细胞类型,选择合适的裂解液进行细胞裂解,离心收集上清后续检测待用。
4.萤火虫荧光信号检测
  注①:萤火虫荧光信号的检测方法大体上取决于冷光测定仪(luminometer)类型(是手动型荧光计、单管注射型或者酶标板读数型荧光计)。根据特定发光测定仪,来考虑注射用量和程序设置。
  注②:需设置不含荧光素酶的孔(用作阴性对照),以测定背景荧光。
  例:注射式冷光测定仪(injectible luminometer,单样或微孔板,200μL终体积)
  a.吸取100μL荧光素酶反应缓冲液(2×)到一干净的冷光测定仪比色皿或96孔板的各孔(最好使用全白平底的96孔板);
  b.吸取50~98μL裂解上清到皿或孔内;
  c.如果有需要,用水来补足使得总体积到198μL;
  d.设置程序注射2μL荧光素储存液(使工作浓度150μg/ml),程序:2~5秒延迟(delay),之后10s测定。

二、活体成像分析
1.用无菌的PBS(w/o Mg2+)或者DPBS(w/o Mg2+)配制D-荧光素(钠盐)工作液(15mg/ml),0.2μm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。一旦使用,放到4℃解冻,保持冰冷且避光。
2.注射量取决于注射方式,具体如下:
注射方式剂量
静脉注射(25-27 gauge针头)按10μL/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液
腹腔注射(25-27 gauge针头)按10μL/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液
肌肉注射(27 gauge针头)50μL,浓度为1-2mg/ml荧光素工作液
鼻内注射(pipette)50μL,浓度为3mg/ml荧光素工作液

3.注射入体内10-20min(待光信号达到最强稳定平台期),再进行成像分析。
注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定最高信号检测时间和信号平台期。
相关搜索:D-荧光素钾盐D-Luciferin Potassium Salt115144-35-9
首页 |  关于我们 |  联系我们 |  在线咨询 |  网站地图
北京百奥莱博科技有限公司 京ICP备14007103号-3